Нуклеин кислотасы синтезы принциплары

Нуклеин кислотасы синтезы каты фазалы сиалик амид триглицерид ысулы ярдәмендә башкарыла, шуның белән ДНКның 3 ′ очлары каты фаза субстратында мобилизацияләнә һәм кирәкле ДНК фрагменты синтезланганчы 3 ′ 5 ′ юнәлештә нуклеотидлар кушыла. .Бу ДНК синтезыннан ДНК полимеразы белән аерылып тора.

Беренче нигезнең 3 ′ очлары синтез вакытында CPGда мобилизацияләнә, киләсе базаның 5′-OH ди-р-толил тритил DMT белән саклана, базадагы аминокруппа бензой кислотасы һәм 3 ′ белән саклана. -OH аннары амино фосфат кушылмасы белән активлаштырыла.1 база 5 5′-ОХның 1 нигезе һәм киләсе нигезнең 3′-OH фосфит триглицерид формалаштыралар, ул йод белән фосфат триглицеридына оксидлаштырыла, 5′-OH икенче баздагы саклаучы чыгарыла. дихлороацетик кислотасы DM циклын киләсе базаны өстәп өстәп, синтездан соң 5′-OH протектанты зәгыйфь кислотасы белән чыгарыла. җылыту астында концентрацияләнгән аммиак гидроксиды белән, аммиак гидроксиды чыгарыла, фрагмент вакуум киптерелә, һәм нуклеин кислотасы сыек хроматография яки PAGE белән чистартыла.

Олиго синтезы адымнары

Деблоклау

.Әр сүзнең5 ахыр DMT саклау төркеме TCA чишелешен өстәп бетерелә.

Активлаштыру

Активаторны олигонуклеотид мономеры белән кушып, актив олигонуклеотид мономеры арасын формалаштыру.

Куплау

5 терминаллы гидроксил группасы актив олигонуклеотид арадашы белән тотрыксыз фосфит триглицерид бәйләнешен формалаштыру өчен анти-генератив конденсация реакциясендә реакциядә.

Каплау 

Каплау агентының кушылуы конденсация реакциясендә катнашмаган артык гидроксил төркемнәре белән ацетиляция каплау реакциясен башкара.

Оксидлаштыру 

Су булган йод эремәсе кушылу тотрыксыз фосфит бәйләнешләре белән реакцияләнә, тотрыклы фосфор кислотасы триглицерид бәйләнешен барлыкка китерә.

Cyианоетил ярылуы

Синтездан соң нуклеин кислотасы продукты, цианетил төркемен фосфат триглицерид бәйләнешеннән чыгару өчен DEA эремәсе кушылып.

Чистартылган

Нуклеин кислотасы фрагментлары каты фаз йөртүчедән концентрацияләнгән аммиак гидроксид эремәсе кушып ярыла, аннары саклаучы төркемнәрне базларның водород бәйләнешеннән чыгару өчен җылытыла.